临床体液检验技术要求（一）
前言
本标准按照GB/T1.1-给出的规划起草。
本标准主要起草单位:国家卫生健康委临床检验中心、上海交通大医院、上海中医院、医院、云南省临床检验中心、医院、医院、医院。
本标准主要起草人:彭明婷、熊立凡、胡晓波、周文宾、李臣宾、李智、牛华、王辉、姜傥、粟*。
临床体液检验技术要求
1范围
本标准规定了脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液、粪便、精液和阴道分泌物等体液标本临床检验的技术要求。
本标准适用于开展上述类型体液标本检测的临床实验室。
2脑脊液检验技术要求
2.1标本采集、转运和贮存
2.1.1实验室应与临床共同讨论并制订脑脊液标本采集和处理的标准操作程序。
2.1.2临床医生应在申请单上注明脑脊液标本采集部位(如腰椎或脑室)的相关信息。
2.1.3脑脊液标本采集宜使用无菌试管(用于细胞学检查的标本不宜使用玻璃材质的容器),若能采集足量标本,应将其分装至3~4支试管,每管宜取3mL~5mL,一般无需使用抗凝剂。
2.1.4第1管用于化学和免疫学检查(如蛋白质、葡萄糖等),第2管用于微生物学检查,第3管用于细胞计数和分类计数。如需要做其它检查(细胞病理学检查等),宜采集第4管标本。若第1管混有穿刺出血,不可用于以蛋白质检查作为主要依据的疾病诊断(如多发性硬化症)。
2.1.5若无法采集足量标本,可不进行分装,由医生决定检查项目;若需要进行微生物学检查,宜优先进行,再尽快进行其他检查。
2.1.6脑脊液标本应在室温条件下尽快运送,细胞计数和分类计数宜在1h内完成检查,以免细胞破损。只有用于蛋白质和核酸分析的标本,可贮存于冷冻条件下(-20℃以下)。
2.1.7脑脊液微生物学检查标本不可冷藏，在室温条件下立即送检或在患者床旁接种。
2.2理学检查
脑脊液理学检查主要包括颜色、透明度和凝固性等。实验室应规定脑脊液理学检查指标描述和报告的规范用语。
2.3化学和免疫学检查
2.3.1脑脊液化学检查主要包括葡萄糖、蛋白质、氯化物、酶学测定和蛋白电泳等,免疫学检查主要包括免疫球蛋白、髓鞘碱性蛋白测定等。
2.3.2实验室应注意各项目不同原理检测方法的灵敏度和特异度差异,选择适宜的方法开展检测。
2.3.3进行脑脊液葡萄糖、白蛋白和免疫球蛋白测定时,宜同时检测血清中的相应物质,计算脑脊液/血清葡萄糖比值、脑脊液/血清白蛋白商(Qalb)、脑脊液/血清IgG商(QIgG)及IgG指数(即QlgG与Qalb比值)。
2.4细胞学检查
2.4.1手工法细胞计数
2.4.1.1宜使用标注容积的血细胞定量计数板进行细胞计数,包括细胞总数、红细胞计数、有核细胞计数和有核细胞分类计数。
2.4.1.2外观正常的标本无需稀释,浑浊和血性标本需进行1:10~1:倍稀释,稀释倍数甚至更高(需要时)。进行细胞计数时可使用等渗盐水稀释标本;进行有核细胞计数时,可使用3%冰醋酸对标本进行处理。
2.4.1.3细胞计数按以下程序进行
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a)将标本充分混匀,充液前可用旋转式搅拌器混匀(时间不能超过2min~5min)或手工颠倒混匀10~15次,避免过度震荡造成细胞破损,也不能产生气泡。
b)分别吸取少量充分混匀的标本,充入计数板两侧的计数池(应确保计数板洁净),静置5min~10min(时间长短取决于细胞沉淀的效果)。
c)使用低倍镜(10x)浏览细胞分布情况,细胞分布应均匀(每个大方格内细胞数量相差宜不超过10个),细胞应无重叠,否则宜重新充液。
d)在高倍镜(40x)下选择合适的区域尽快进行细胞计数。每个计数池细胞计数区域的确定原则是:若初步估计9个大方格中细胞数少于个,则计数9个大方格(计数区域相当于9mm2)若估计9个大方格中细胞数大于个,则计数4个角的大方格(计数区域相当于4mm2);若估计1个大方格中细胞数大于个,则计数中央大方格内4个角和中央1个中方格(计数区域相当于0.2mm2)。计数压线细胞时,应遵循“数上不数下,数左不数右”的原则。
2.4.1.4红细胞计数和有核细胞计数宜在同一计数池中完成,取两个计数池计数结果的均值进行报告。
2.4.2仪器法细胞计数
仪器法细胞计数的要求见附录A。
2.4.3细胞形态学检查
2.4.3.1应在标本采集后4h内完成细胞涂片,若超过4h,结果报告时宜标注“细胞分类计数结果可能不可靠。
2.4.3.2宜使用细胞离心涂片机(细胞甩片机)制备涂片进行细胞形态学检查,滴加标本前先向甩片机标本室中加入1滴22%白蛋白溶液(无菌),可增强细胞对载玻片的粘附性。
2.4.3.3涂片制备后应置于室温条件自然晾干,宜进行改良瑞氏染色。
2.4.3.4进行细胞形态检查时,应能正确识别:成熟红细胞、有核红细胞;中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞;淋巴细胞、反应性淋巴细胞、浆细胞;单核细胞、巨噬细胞;脑室内衬细胞、柔脑膜细胞;恶性肿瘤细胞(原始细胞、淋巴瘤细胞、非造血系统肿瘤细胞等);细菌、真菌和寄生虫等。
2.4.3.5应对有核细胞(包括各类造血细胞、内衬细胞、肿瘤细胞和非典型细胞)进行分类计数,计数结果以百分比报告。细胞类型无法确定时，可将其归入“非典型细胞”,并在报告中加以描述。
2.4.3.6怀疑恶性肿瘤时,应全片查找肿瘤细胞,发现疑似肿瘤细胞时应及时通知临床进一步做细胞病理学检查。
2.5病原学检查
2.5.1涂片检查
对混浊或脓性脑脊液可直接涂片,染色镜检。对无色透明或无明显混浊的脑脊液,应使用细胞离心涂片机(细胞甩片机)离心。将脑脊液标本离心取沉淀物进行涂片,经革兰染色查找肺炎链球菌、葡萄球菌和链球菌等,亚甲蓝染色查找脑膜炎奈瑟菌,抗酸染色查找结核分枝杆菌,墨汁染色查找隐球菌。对于疑似寄生虫感染的患者,应注意查找吸虫卵、阿米巴滋养体和绦虫囊尾蚴等。
2.5.2病原体培养
选择合适的培养基、培养条件进行普通细菌、苛养菌、结核分枝杆菌或真菌培养,临床怀疑脑脓肿时宜进行厌氧菌培养。所有进行培养的脑脊液宜同时进行病原菌的涂片检查。
2.5.3抗原检测
可检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、隐球菌等病原菌抗原,检测结果宜与涂片检查和病原培养结果一起解释,脑脊液隐球菌抗原阳性有确诊意义;其他抗原阳性是重要诊断提示,宜结合病史、临床表现、脑脊液其他检查(细胞学、涂片和培养、化学等)综合判断。
2.5.4核酸检测
必要时,实验室可采用PCR等分子生物学方法检测结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌等病原菌核酸。
3浆膜腔积液检验技术要求
3.1标本采集、转运和贮存
3.1.1浆膜腔积液包括胸水、腹水、心包腔积液等,实验室应与临床共同制订标本采集和处理的标准操作程序,并向临床提供正确的标本采集容器和抗凝剂(必要时)。不同检查项目的标本来集要求见表1。
表1浆膜腔积液标本采集要求检查项目抗凝剂的选用推荐采集标本量(ml)细胞计数和分类计数乙二胺四乙酸(EDTA)5~8总蛋白、乳酸脱氢酶、葡萄糖、淀粉酶肝素或不使用抗凝剂8~10革兰染色涂片检查、细菌培养多聚茴香脑磺酸钠(SPS)、不使用抗凝剂、无灭菌或抑菌作用的抗凝剂8～10抗酸杆菌培养多聚茴香脑磺酸钠(SPS)、不使用抗凝剂、无灭菌或抑菌作用的抗凝剂15~50细胞病理学检查不使用抗凝剂、肝素、乙二胺四乙酸(EDTA)5~.1.2标本应在室温条件下尽快送检;细胞计数和分类计数的标本应尽快检测,若无法及时检测,染色后的标本置于2℃~8℃条件下保存,宜48h内完成检测。
3.2理学检查
浆膜腔积液理学检查主要包括颜色、透明度和凝固性等。实验室应规定浆膜腔积液理学检查指标描述和报告的规范用语。
3.3化学和免疫学检查
3.3.1浆膜腔积液化学检查主要包括蛋白质、乳酸、葡萄糖和酶学测定等;免疫学检查主要包括肿瘤标志物、免疫球蛋白测定等。
3.3.2葡萄糖测定应在标本采集后1h内完成,无法及时检测的标本应用氟化钠抗凝管采集;其他化学检查宜在2h内完成;宜同时检测血清标本中的相应物质并进行比较。
3.3.3严重化脓标本不宜进行pH检测。
3.4细胞学检查
3.4.1浆膜腔积液细胞学检查主要包括细胞计数和分类计数等。
3.4.2细胞数量过多、浑浊或血性标本宜用等渗盐水进行稀释;有凝块的标本不能用于细胞计数和分类计数,但可用于细胞病理学检查,需先轻轻搅动凝块释出细胞并进行洗涤处理。
3.4.3细胞计数方法可参见2.4.1.3。
3.4.4细胞分类计数宜采用细胞离心法制备涂片,应先洗涤细胞,以提高涂片中的细胞数量并保持细胞形态。涂片自然干燥,宜使用改良瑞氏染色方法染色后进行细胞分类计数,发现可疑恶性细胞时,应及时通知临床送细胞病理学检查;发现结晶时,应在报告中注明。
3.5病原学检查
怀疑感染时,所有标本应进行革兰染色涂片和培养。怀疑厌氧菌感染,则加做厌氧菌培养;腹水、肝脓肿穿刺液宜常规进行厌氧菌培养。怀疑寄生虫感染时,应将标本离心后取沉渣进行涂片,宜使用改良瑞氏染色方法进行检查,查找有无微丝蚴、包虫棘球蚴头节和小钩、阿米巴滋养体等。4关节腔积液检验技术要求
4.1标本采集、转运和贮存
4.1.1实验室应与临床共同制订关节腔积液标本采集和处理的标准操作程序,并向临床提供正确的标本采集容器和抗凝剂。
4.1.2采集多管标本时,第1管应使用无抗凝剂试管,宜采集4mL~5mL,并观察是否凝固,离心取上清液做化学和免疫学检查(如葡萄糖、白蛋白和脂类,类风湿因子和补体测定等);第2管应使用肝素钠(25U/mL)或EDTA溶液抗凝,用于细胞计数、分类计数和结晶鉴定时宜采集1mL~3mL,如同时做细胞病理学检查时宜采集4mL~5mL,使用肝素锂、草酸盐或EDTA粉末抗凝,可能影响结晶检查结果;第3管应使用肝素(25U/mL)抗凝、也可以采用多聚茴香脑磺酸钠(SPS)抗凝剂或无抗凝剂试管,宜采集4mL~5mL,用于微生物学检查。
4.1.3当标本量较少难以完成所有检查时,应及时与临床进行沟通,不宜拒收标本。
4.1.4标本应在室温条件下尽快送检并完成检查。
4.2理学检查
关节腔积液理学检查主要包括颜色、透明度、黏稠度及凝固性等。实验室应规定关节腔积液理学检查指标的描述和报告的规范用语。
4.3化学和免疫学检查
4.3.1关节腔积液化学检查主要包括葡萄糖、尿酸、乳酸、脂类和蛋白质测定等,免疫学检查主要包括自身抗体和类风湿因子等;进行化学和免疫学检查时宜同时检测血清标本中的相应物质并进行比较。
4.3.2葡萄糖测定应在1h内完成,无法及时检测的标本应使用氟化钠抗凝管采集。
4.4细胞学和结晶检查
4.4.1标本处理
4.4.1.1关节腔积液较为粘稠,宜使用等渗盐水或透明质酸酶缓冲液对标本进行处理,如每毫升关节腔积液加透明质酸酶单位,置于37℃孵育10min.
4.4.1.2细胞数量过多、浑浊或血性标本宜用等渗盐水进行稀释;进行有核细胞计数时,可使用低渗性盐水(0.3%)破坏红细胞,但不可使用乙酸,以免形成黏蛋白凝块影响镜检。
4.4.2涂片检查
宜使用细胞离心法制备湿片和染色涂片(涂片自然晾干后用甲醇固定至少5min,宜使用改良瑞氏染色方法,进行细胞学和结晶检查。宜使用光学显微镜的暗视野或偏振光显微镜进行结晶检查(如尿酸盐结晶、焦磷酸钙结晶),应注意区分尘粒、划痕、碎片与病理性结晶。
4.4.3细胞计数
细胞计数方法同脑脊液细胞计数,宜在标本采集后1h内完成检测。关节腔积液标本较难混匀,可用旋转式搅拌器混匀5min~10min,避免过度震荡造成细胞破损。
4.5病原学检查
应作为关节腔积液常规检查项目,将标本离心后取沉淀进行革兰染色涂片检查,查找有无致病菌。必要时,根据临床表现选择合适的培养基进行细菌或真菌培养。未完待续。。。凌建
