本次研究所使用的的AAV为宜明细胞美国兄弟公司Vigene完成,长期以来Vigene一直作为Biogen重要合作伙伴,为其提供高质量的AAV产品,并获得Biogen技术团队的高度认可。
背景介绍研究人员主要在两处环节对传统方法进行了优化:
◆使用AAV代替质粒DNA作为qPCR参照标准品;
◆在标准品和样品制备中加入5%Tween20从而实现“无酶解”的方法。
腺相关病*(rAAV)是一种无包膜病*,包含一个被二十面体外壳包裹的单链DNA基因组。人们通常通过测量衣壳蛋白或AAV基因组来确定rAAV的数量。由于空衣壳不具有治疗作用,因此在临床给药、制造和分析测试中,首选滴定病*基因组的方法。传统上,AAV基因组滴度是以质粒DNA作为标准品、用qPCR来测定的。近二十年来,人们在qPCR的标准制备、样品处理、引物/探针设计等方面做了大量的研究改进。然而qPCR的方法仍然存在很大的变数,不同实验室之间的相对标准差(RSD)高达70%以上。目前,人们越来越