多发性硬化

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TUhjnbcbe - 2020/11/24 12:27:00
宜明细胞内容团队编辑重组腺相关病*(rAAV)是基因治疗的主要载体之一。准确的基因组滴度不仅是临床给药的关键,也是许多AAV产品检定分析的先决条件。目前AAV基因组滴度主要采用qPCR法测定。然而,尽管进行了深入广泛的研究,传统qPCR法测定的精准度仍不理想。随着PCR技术的深入发展,ddPCR作为传统qPCR的替代品,其具有极佳的准确性和精密度。但因其低通量、高成本,致使ddPCR的应用远不及qPCR广泛。今天我们推荐一篇由美国Biogen,Inc的YuWang等在MolecularTherapy:MethodsClinicalDevelopment发表的一篇文章:AqPCRMethodforAAVGenomeTiterwithddPCR-LevelofAccuracyandPrecision。该文章将在12月刊出,本篇文章提出了一种改良的qPCR测定AAV滴度的方法。

本次研究所使用的的AAV为宜明细胞美国兄弟公司Vigene完成,长期以来Vigene一直作为Biogen重要合作伙伴,为其提供高质量的AAV产品,并获得Biogen技术团队的高度认可。

背景介绍

研究人员主要在两处环节对传统方法进行了优化:

◆使用AAV代替质粒DNA作为qPCR参照标准品;

◆在标准品和样品制备中加入5%Tween20从而实现“无酶解”的方法。

腺相关病*(rAAV)是一种无包膜病*,包含一个被二十面体外壳包裹的单链DNA基因组。人们通常通过测量衣壳蛋白或AAV基因组来确定rAAV的数量。由于空衣壳不具有治疗作用,因此在临床给药、制造和分析测试中,首选滴定病*基因组的方法。传统上,AAV基因组滴度是以质粒DNA作为标准品、用qPCR来测定的。近二十年来,人们在qPCR的标准制备、样品处理、引物/探针设计等方面做了大量的研究改进。然而qPCR的方法仍然存在很大的变数,不同实验室之间的相对标准差(RSD)高达70%以上。目前,人们越来越
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